如何选择酶标仪

2020年,新冠肺炎全球爆发 ,常规的核酸检测判别是否感染新冠病毒,血清抗体检测则可以揭示中国人群新冠病毒的感染情况,随着疫情防控常态化 ,大规模血清检测对于监控人群免疫情况十分必要。如此看来,作为酶联免疫检测的核心仪器,酶标仪的采购情况被业内看好 。

酶标仪作为一个常用的仪器 ,其基本功能不外乎一个比色测定,与比色计所不同的是在测定波长范围、吸光度范围、光学系统 、检测速度、震板功能、温度控制 、定性和定量测定软件功能等方面的差异,当然全自动酶免疫分析系统还具有自动洗板、温育、加样等功能。那么 ,实验室在选购酶标仪的时候都要注意哪些关键信息呢?

滤光系统

酶标仪最简单的是用滤光方式来划分。一般来说,可以分为滤光片型和光栅型两大类 。也有一些酶标仪里面同时装上了滤光片和光栅。但是滤片和光栅并不能同时完成同一个检测,本质上还只是把滤片和光栅放在了一起 ,并没有使两者糅合而产生新的技术突破。光栅型滤光系统具有使用方便 ,可以进行光谱扫描,灵活性等优点 。当然,滤光片系统也有其显著的优势 ,例如价格较为便宜,检测灵敏度高,带宽的可选择性 ,可以进行快速的滤光片切换,可配备有自动加样系统,在化学发光检测中光线的透过率高。目前 ,滤光片系统应用更广,因为它可以让实验者完成更多的试验。

测定波长

如何选择酶标仪

一般酶标仪的测定波长在400~750nm或800nm之间,完全可以满足ELISA的显色测定 。目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根过氧化物酶(HRP) ,底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD),其在过氧化氢溶液的存在下,经HRP作用 ,分别氧化为2 ,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。当pH值为5.0左右时,DAB在450nm波长处有最大吸收 ,当pH值降为L 0时,最大吸收波长移至492 nm,同时摩尔消光系数变大 ,显色加深,因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。TMB的氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数,如果HRP量少 ,H:O:和TMB过量时,则形成蓝色的阳离子根 。降低pH,即可使蓝色的阳离子根转变为**的联苯醌 ,使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min 。因此,450nm和492 nm两个波长是目前ELISA测定最常用的。各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件,可以同时安装6~8片滤光片 ,所配备的滤光片均应包括上述两个波长 ,有的酶标仪以490nm滤光片替代492nm滤光片,影响不大。除了这两个基本滤光片外,考虑到双波长比色的需要 ,还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片,其他滤光片可根据自己的需要选择 。有时,有的实验室希望用酶标仪作微量生化测定 ,故酶标仪生产厂家对其生产的酶标仪扩展了紫外检测功能,此时需要一个340 nm波长滤光片。此时,酶标仪的测定波长范围就成为340—750nm或800nm。酶标仪有单波长和双波长检测功能 。有时使用者不知在什么情况下使用单或双波长检测。所谓的“单波长”就是使用一种对显色具最大吸收的波长即450 nm或492 nm进行比色测定;而“双波长”则除了用对显色具最大吸收的波长即450 nm或492 nm进行比色测定外 ,同时用对特异显色不敏感的波长如630 nm进行测定,酶标仪最后打印出来的吸光度则为二者之差。630 nm波长下得到的吸光度是非特异的,来自于板孔上诸如指纹 、灰尘、脏物等所致的吸收 。因此 ,在ELISA比色测定中,最好使用双波长,且不必设空白孔。

测定的吸光度范围

通常 ,酶标仪的吸光度测定范围在0~2.5之间即可以满足ELISA的测定要求。早期的酶标仪可测定的吸光度一般在0~2.5之间 ,但现在基本上都做了拓宽,可达到3.5以上,并且能保持很好的精密度与线性 。因此 ,对于酶标仪的吸光度范围不必去刻意追求大的吸光度范围,主要要看在一定的吸光度范围内的线性和精密度如何。

光学系统

如何选择酶标仪

酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道(通常为8或12通道,亦有单通道)检测 ,一般为硅光管或光导纤维,除测定通道外,有的酶标仪还有一个参比通道 ,每次测定可进行自我校准。酶标仪的光学系统功能如何,均可通过酶标仪测定的吸光度范围、线性度 、精密度和准确度等体现出来 。光学系统好的话,则上述指标也应较佳 。测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。单通道可避免因通道不同所致的差异。

检测速度

酶标仪的检测速度是指其完成比色测定所需要的时间 。检测速度快 ,有利于提高检测的精密度,即避免由于测定过程中,因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差异。目前市场上常见的酶标仪检测速度都非常快 ,通常在数秒钟内。

震板功能

如何选择酶标仪

酶标仪的震板功能是指酶标仪在对ELISA板孔进行比色测定前对其进行振荡混匀 ,使板孔内颜色均一 。目前市场上常见的酶标仪均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋转等方式及振荡幅度等任意调节;有的则较为固定。使用有震板功能的酶标仪 ,在进行ELISA测定显色反应完成加入终止剂后,可不必振荡混匀,直接放人酶标仪上测定即可。

温育功能

温育功能是指酶标仪本身能按要求自动精确地控制仪器内部的温度 ,使得ELISA测定中微孔板条的温育过程可在仪器内部完成,而无需再外配温箱 。目前,只有少部分酶标仪具有此种功能 ,温育功能只是酶标仪的一个附加功能,是否具有并不能说明酶标仪档次的高低及仪器的优劣。作为实验室是否选择,则可根据自己实验室的条件及需要来决定。

软件功能

软件功能是指酶标仪所具有的对ELISA定性和定量测定及其他测定方式如酶标动力学、紫外和凝集等数据的统计分析并报告结果的功能 。软件功能是中高档酶标仪的一个非常重要的功能。如果硬件方面区别不大 ,则软件就成为判定酶标仪优劣的惟一指标。对于用户来说,好的软件功能,对实际工作会有较大的帮助 。ELISA定性测定 ,酶标仪如具有阳性判断值(cut-off)及其测定“灰区 ”(即指测定吸光度处于cut—off周围的一定区域 ,此区域内结果应为“可疑”)的统计计算功能,不但方便了实验室工作人员,而且在某些特定的情况下 ,有很高的实用价值 。因此,如目的是定量测定,则在酶标仪的软件功能中 ,最好要有这种曲线回归方程计算分析功能。其他诸如连点 、直线等回归计算,则可根据酶标仪的应用目的而定,如兼用于微量生化测定 ,则此类回归计算就很有必要。此外,酶标仪兼做酶标动力学 、凝集反应测定所需的软件是否应具备,当然也应根据使用目的而定 。由于此类软件一般都较为昂贵 ,酶标仪常另外单独按需配备,如果不是实验室特殊需要,就不必强求这种软件功能。

语言界面

通常进口的中高档酶标仪人机对话多采用英文。这对于某些基层实验室可能会存在语言方面的困难 ,从而难以最大限度地发挥酶标仪的作用 。为解决这方面的问题 ,已有一些酶标仪采用了中文界面。这样就大大方便了广大基层实验室技术人员的使用。综上所述,尽管酶标仪的发展极为快速,种类繁多 ,功能也不断加强,但其最根本的功用是不变的,即比色测定 。大凡比色测定 ,其基本要求就是在一定吸光度范围内要有好的测定准确性、线性和精密性。同样的吸光度范围,测定的准确性、线性和精密性越好则酶标仪亦越佳。而且,由于用于酶标仪比色测定的为多孔(通常为96孔)微孔板条 ,为保证测定的孔间重复性,则测定速度也是一个较重要的性能指标 。至于其他如震板 、温育及有关的软件功能,则是选配功能 ,不影响酶标仪其他的使用性能。答案来自

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